Kichujio cha fluorescence ni sehemu muhimu katika darubini ya fluorescence. Mfumo wa kawaida una vichujio vitatu vya msingi: chujio cha kusisimua, chujio cha utoaji na kioo cha dichroic. Kwa kawaida huwekwa kwenye mchemraba ili kikundi kiingizwe pamoja kwenye darubini.
Kichujio cha fluorescence hufanyaje kazi?
Kichujio cha Kusisimua
Vichujio vya kusisimua husambaza mwanga wa urefu maalum wa mawimbi na kuzuia urefu mwingine wa mawimbi. Zinaweza kutumika kutoa rangi tofauti kwa kurekebisha kichujio ili kuruhusu rangi moja tu kupita. Vichujio vya kusisimua vinakuja katika aina mbili kuu - vichujio vya kupita kwa muda mrefu na vichujio vya kupitisha bendi. Kisisimuo kwa kawaida ni kichujio cha bendi ambacho hupitisha urefu wa mawimbi tu unaofyonzwa na fluorophore, hivyo basi kupunguza msisimko wa vyanzo vingine vya fluorescence na kuzuia mwanga wa msisimko katika bendi ya utoaji wa fluorescence. Kama inavyoonyeshwa na mstari wa bluu kwenye takwimu, BP ni 460-495, ambayo ina maana kwamba inaweza tu kupitia fluorescence ya 460-495nm.
Huwekwa ndani ya njia ya mwangaza ya darubini ya fluorescence na kuchuja urefu wote wa mawimbi ya chanzo cha mwanga isipokuwa safu ya msisimko wa fluorophore. Usambazaji wa chini wa kichujio unaonyesha mwangaza na uzuri wa picha. Kiwango cha chini cha 40% cha upitishaji kwa chujio chochote cha msisimko kinapendekezwa hivi kwamba upitishaji ni bora >85%. Upeo wa data wa kichujio cha msisimko unapaswa kuwa ndani kabisa ya safu ya msisimko wa fluorophore hivi kwamba urefu wa mawimbi ya kati (CWL) ya kichujio iwe karibu iwezekanavyo na kilele cha urefu wa wimbi la msisimko wa fluorophore. Kichujio cha msisimko msongamano wa macho (OD) huamuru giza la picha ya mandharinyuma; OD ni kipimo cha jinsi kichujio huzuia vyema urefu wa mawimbi nje ya masafa au kipimo data. Kiwango cha chini cha OD cha 3.0 kinapendekezwa lakini OD ya 6.0 au zaidi ni bora.
Kichujio cha Utoaji
Vichungi vya kutoa uchafu hutumikia madhumuni ya kuruhusu umeme unaohitajika kutoka kwa sampuli kufikia kigunduzi. Wanazuia urefu mfupi wa mawimbi na kuwa na maambukizi ya juu kwa urefu mrefu wa wavelengths. Aina ya kichujio pia inahusishwa na nambari, kwa mfano BA510IF kwenye kielelezo (kichujio cha kizuizi cha mwingiliano), jina hilo linarejelea urefu wa wimbi katika 50% ya upitishaji wake wa juu.
Mapendekezo yale yale ya vichujio vya msisimko yana ukweli kwa vichujio chafu: upitishaji wa chini zaidi, kipimo data, OD, na CWL. Kichujio cha utoaji chafu chenye CWL bora, upitishaji wa kiwango cha chini zaidi, na mchanganyiko wa OD hutoa picha zinazong'aa zaidi, zenye kizuizi cha ndani kabisa, na huhakikisha ugunduzi wa mawimbi hafifu zaidi ya utoaji.
Kioo cha Dichroic
Kioo cha dichroic huwekwa kati ya kichujio cha msisimko na kichujio cha kutoa uchafu kwa pembe ya 45° na huakisi ishara ya msisimko kuelekea fluorophore huku kikipeleka mawimbi ya utoaji hewa kwa kigunduzi. Vichujio bora vya dichroic na vigawanyiko vya boriti vina mpito mkali kati ya uakisi wa juu zaidi na upitishaji wa juu zaidi, na uakisi wa >95% wa kipimo data cha kichujio cha msisimko na upitishaji wa >90% kwa kipimo data cha kichujio cha kutoa uchafu. Chagua kichujio kwa kuzingatia urefu wa makutano (λ) wa fluorophore, ili kupunguza mwangaza-potevu na kuongeza uwiano wa ishara na kelele wa picha ya umeme.
Kioo cha dichroic katika takwimu hii ni DM505, kilichoitwa hivyo kwa sababu nanometers 505 ni urefu wa wimbi katika 50% ya upitishaji wa juu wa kioo hiki. Mkondo wa upitishaji wa kioo hiki unaonyesha upitishaji wa juu zaidi ya nm 505, kushuka kwa kasi kwa upitishaji upande wa kushoto wa nanomita 505, na uakisi wa juu zaidi upande wa kushoto wa nanomita 505 lakini bado unaweza kuwa na upitishaji chini ya 505 nm.
Kuna tofauti gani kati ya vichungi vya kupita kwa muda mrefu na kupita kwa bendi?
Filters za fluorescence zinaweza kugawanywa katika aina mbili: kupita kwa muda mrefu (LP) na kupitisha bendi (BP).
Vichungi vya kupita kwa muda mrefu husambaza urefu wa mawimbi na kuzuia zile fupi. Urefu wa urefu wa mawimbi ni thamani ya 50% ya maambukizi ya kilele, na urefu wote wa wimbi juu ya kukata hupitishwa na vichujio vya kupita kwa muda mrefu. Mara nyingi hutumiwa katika vioo vya dichroic na vichungi vya uzalishaji. Vichujio vya Longpass vinapaswa kutumika wakati programu inahitaji mkusanyiko wa juu zaidi wa utoaji na wakati ubaguzi wa spectral haupendekewi au ni lazima, ambayo kwa ujumla ni kesi ya uchunguzi ambao hutoa spishi moja inayotoa moshi katika vielelezo vilivyo na viwango vya chini sana vya mandharinyuma ya autofluorescence.
Vichungi vya kupitisha bendi husambaza mkanda fulani wa urefu wa wimbi, na kuwazuia wengine. Hupunguza mseto kwa kuruhusu tu sehemu yenye nguvu zaidi ya wigo wa utoaji wa fluorophore kupitishwa, kupunguza kelele ya autofluorescence na hivyo kuboresha uwiano wa mawimbi kati ya kelele katika sampuli za mandharinyuma ya juu ya autofluorescence, ambayo vichujio vya kupita kwa muda mrefu haviwezi kutoa.
Je! ni aina ngapi za seti za vichungi vya fluorescence BestScope inaweza kutoa?
Baadhi ya aina ya kawaida ya filters ni pamoja na bluu, kijani, na filters ultraviolet. Kama inavyoonyeshwa kwenye jedwali.
| Seti ya Kichujio | Kichujio cha Kusisimua | Kioo cha Dichroic | Kichujio cha Kizuizi | Taa ya LED Urefu wa Wimbi | Maombi |
| B | BP460-495 | DM505 | BA510 | 485nm | ·FITC: Mbinu ya kingamwili ya fluorescent · Asidi ya chungwa: DNA, RNA ·Auramine: Bacillus ya Tubercle ·EGFP, S657, RSGFP |
| G | BP510-550 | DM570 | BA575 | 535nm | ·Rhodamine, TRITC: Mbinu ya kingamwili ya fluorescent · Propidium iodidi: DNA ·RFP |
| U | BP330-385 | DM410 | BA420 | 365nm | · Uchunguzi wa umeme-otomatiki ·DAPI: Uchafuzi wa DNA ·Hoechest 332528, 33342: inatumika kwa uwekaji wa rangi kwenye Chromosome |
| V | BP400-410 | DM455 | BA460 | 405nm | ·Katekisimu · 5-hydroxy tryptamine ·Tetracycline: Mifupa, Meno |
| R | BP620-650 | DM660 | BA670-750 | 640nm | · Cy5 · Alexa Fluor 633, Alexa Fluor 647 |
Seti za vichujio ambazo hutumika katika upataji wa umeme zimeundwa kuzunguka urefu wa mawimbi kuu unaotumika katika utumizi wa umeme, ambao unategemea fluorophore zinazotumiwa zaidi. Kwa sababu hii, pia hupewa jina la fluorophore ambayo imekusudiwa kupiga picha, kama vile DAPI (bluu), FITC (kijani) au TRITC (nyekundu) cubes za chujio.
| Seti ya Kichujio | Kichujio cha Kusisimua | Kioo cha Dichroic | Kichujio cha Kizuizi | Taa ya LED Urefu wa Wimbi |
| FITC | BP460-495 | DM505 | BA510-550 | 485nm |
| DAPI | BP360-390 | DM415 | BA435-485 | 365nm |
| TRITC | BP528-553 | DM565 | BA578-633 | 535nm |
| FL-Auramine | BP470 | DM480 | BA485 | 450nm |
| Texas Nyekundu | BP540-580 | DM595 | BA600-660 | 560nm |
| mCherry | BP542-582 | DM593 | BA605-675 | 560nm |
Jinsi ya kuchagua chujio cha fluorescence?
1. Kanuni ya kuchagua kichujio cha fluorescence ni kuruhusu mwanga wa fluorescence/utoaji kupita kwenye mwisho wa upigaji picha kadiri inavyowezekana, na kuzuia kabisa mwanga wa msisimko kwa wakati mmoja, ili kupata uwiano wa juu zaidi wa mawimbi kati ya mawimbi na kelele. Hasa kwa utumiaji wa msisimko wa picha nyingi na hadubini ya jumla ya uakisi wa ndani, kelele dhaifu pia itasababisha mwingiliano mkubwa wa athari ya kupiga picha, kwa hivyo hitaji la uwiano wa mawimbi kwa kelele ni kubwa zaidi.
2. Jua msisimko na wigo wa utoaji wa fluorophore. Ili kuunda seti ya kichujio cha fluorescence ambayo hutoa picha ya ubora wa juu, yenye utofautishaji wa juu yenye mandharinyuma meusi, vichujio vya kusisimua na utoaji wa hewa chafu vinapaswa kufikia upitishaji wa hali ya juu na ripuki ndogo ya pasi juu ya maeneo ambayo yanalingana na kilele au utokaji wa msisimko wa fluorophore.
3. Fikiria uimara wa filters za fluorescence. Vichujio hivi lazima vishindwe na vianzo vikali vya mwanga vinavyotoa mwanga wa urujuanimno (UV) ambao unaweza kusababisha "kuchoka", hasa kichujio cha kichocheo kwa kuwa kinakabiliwa na nguvu kamili ya chanzo cha mwanga.
Picha za Sampuli tofauti za Fluorescent
Rasilimali hukusanywa na kupangwa kwenye Mtandao, na hutumiwa tu kwa kujifunza na mawasiliano. Ikiwa kuna ukiukaji wowote, tafadhali wasiliana nasi ili kufuta.
Muda wa kutuma: Dec-09-2022